Ученые используют серийные разведения (серия разведений 1:10) для расчета плотности популяции бактериальных культур. Когда капля культуры, содержащей небольшое количество бактерий, помещается на чашки и инкубируется, каждая клетка теоретически будет находиться достаточно далеко от других клеток, чтобы образовать свою собственную колонию. (На самом деле некоторые колонии могут быть потомками двух соседних клеток, но это редко встречается в разбавленных культурах, и поэтому количество колоний является очень хорошей оценкой количества клеток, первоначально перенесенных в чашку.) Поскольку плотность популяции равна неизвестно, необходимо использовать различные разведения, чтобы в итоге получить одну чашку с соответствующим количеством колоний.
Пометьте шесть пробирок (каждая из которых содержит 9 мл питательной среды) как от 1 до 6. Пометьте шесть планшетов с агаром как от 1 до 6. Используйте пипетку и стерильные наконечники для пипеток на 1 миллилитр (мл), чтобы перенести 1 мл бактериальной культуры в пробирку 1. Хорошо перемешайте и перенесите 1 мл из пробирки 1 в пробирку 2 с помощью пипетки и стерильных наконечников на 1 мл.
Повторите шаг 2 для остальных пробирок, каждый раз перенося 1 мл из последней использованной пробирки в следующую. С помощью пипетки и стерильных наконечников 0,1 мл перенесите 0,1 мл из пробирки 1 на чашку с агаром. Подожгите L-образный стеклянный стержень и используйте его, чтобы равномерно распределить каплю по тарелке. Инкубируйте планшет в течение 48 часов при температуре, подходящей для используемых бактерий. Различные типы бактерий имеют разные оптимальные температуры роста. Если вы не можете найти оптимальную температуру роста, используя эталонный материал, попробуйте инкубировать чашки при 25 и 37 градусах. Повторите шаг 4, каждый раз перенося жидкость из другой пробирки на соответствующий планшет.
Наблюдайте за шестью чашками и выберите ту, в которой содержится от 30 до 200 изолированных колоний. Умножьте количество колоний на планшете на 10, чтобы рассчитать количество клеток на мл культуры из используемой пробирки для разведения. Умножьте число из шага 2 на 10^(номер чашки), чтобы рассчитать количество клеток на мл исходной культуры. Значение 10^(номер чашки) – это коэффициент разведения культуры, использованной для инокуляции этой чашки.
© digitrode.ru