Один из классических способов определения концентрации микробов в образце – разбавить образец, выращивать микробы на чашках и подсчитывать колонии. Микробы в чашках растут из колониеобразующей единицы, состоящей из одной или нескольких клеток, в видимую колонию, которую можно увидеть и подсчитать. Бактерии - это наиболее распространенные микробы, которые можно оценить с помощью подсчета на чашках. Подсчет колоний используется для обнаружения и подсчета микробов в почве, воде и продуктах питания. Протоколы подсчета колоний подчеркивают точный и методичный подход.
Если вы просто нанесете образец микроба на чашку с агаром, вы увидите так много колониеобразующих единиц, что отдельные колонии будут смешиваться вместе, что сделает их невозможным для подсчета. Чтобы решить эту проблему, смешайте образец с жидкой средой, возьмите небольшое количество этой смеси и дополнительно разбавьте ее. Повторите этот процесс шесть-десять раз. Нанесите последнее разведение на чашку с агаром и инкубируйте его в течение четырех-семи дней, прежде чем подсчитывать колонии.
Основная хитрость при подсчете колоний - это подсчитать каждую точку колонии один раз. Один из подходов состоит в том, чтобы установить чашку Петри на фоне сетки и подсчитать колонии в каждой ячейке сетки, последовательно перемещаясь по всем ячейкам. Маркировка подсчитанных колоний на обратной стороне чашки Петри также может быть полезным подходом. Как правило, вам нужно будет насчитать не менее трех тарелок; Используйте только чашки, содержащие от 30 до 300 колоний, чтобы делать надежные выводы, предлагает Microbiology Network, фирма, предоставляющая консультационные услуги лабораториям и производителям. Чашки с колониями, которые слишком многочисленны для подсчета, или со слишком малым количеством колоний, необходимо повторно засеять из нового разведения.
Человеческая ошибка увеличивает время, затрачиваемое на подсчет колоний вручную. Чтобы повысить точность и эффективность, поместите чашку Петри в устройство автоматического подсчета колоний. Автоматические счетчики колоний делают изображение чашки, отделяют колонии от фона и затем используют алгоритм для подсчета колоний на чашке. У алгоритмов могут возникнуть трудности с различением колоний, когда две или более колонии соприкасаются краями, поэтому это область постоянной разработки программного обеспечения.
Точность расчета плотности микробов по подсчету колоний имеет некоторые ограничения. Колониеобразующие единицы могут быть одной клеткой, цепочкой клеток или целым скоплением клеток. Предполагается, что колония представляет собой одну клетку, поэтому концентрации, рассчитанные на основе подсчета колоний, могут быть низкими. Разным микробам нужны разные условия роста, и колонии на планшете представляют только те микробы, которые процветают на этой питательной среде в этих условиях инкубации. Кроме того, подсчет колоний не регистрирует мертвые клетки, что является важным соображением, когда вам нужна концентрация клеток в исходном образце.
© digitrode.ru